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動物器官組織的研磨對比效果

文章來源: 作者:admin 人氣:1144 發(fā)表時間:2017-05-15 01:33:22

每50~100mg 組織加入0.2體積 TRIzol

1.加鋼珠1顆,設(shè)置研磨儀參數(shù):12單位振頻,1min,每種樣品基本充分勻漿

2. 將上述勻漿液每0.2體積 TRIzol 試劑用量的勻漿液中加入0.04體積氯仿,蓋緊管蓋,手動劇烈震搖15 秒鐘,然后室溫靜置2~3 分鐘。

3. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。

4. 小心吸取上層水相(無色)加入到新試管中,同時計算所吸取的水相體積。不必過多吸取,防止吸入DNA和蛋白雜質(zhì)(中間層,白色)。

5. 加入所吸取水相等體積預(yù)冷的異丙醇,蓋緊管蓋,輕輕搖勻。

6. 室溫靜置10 分鐘,待RNA 充分沉淀(為減少RNA 降解,此步驟可省略)。

7. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。

8. 將上清棄除(注意別丟棄沉淀),每管加入0.2體積75%乙醇潤洗,蓋緊管蓋,輕輕晃動試管,以去除殘留的異丙醇和鹽份。4℃ 7,500g 離心5 分鐘。

9. 將上清棄除(注意別丟棄沉淀),打開管蓋,將RNA 沉淀干燥(室溫?fù)]發(fā)或真空干燥)。注意RNA 沉淀不可完全干燥,否則難以溶解。

10. 將RNA 沉淀溶解于適量的無RNase 水中。如果RNA 沉淀溶解不完全,將使OD260/OD280≤1.6。此RNA 溶液可用于進(jìn)一步實(shí)驗,或者-70℃保存。

實(shí)驗結(jié)果

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